工作液配制计算 · 标准品稀释指导 · 实验步骤说明
| 管号 | 稀释液体积 (μL) |
BSA体积和来源 (μL) |
BSA终浓度 (μg/mL) |
|---|---|---|---|
| A | 0 | 300 μL 原液 | 2000 |
| B | 125 | 375 μL A管 | 1500 |
| C | 325 | 325 μL 原液 | 1000 |
| D | 175 | 175 μL B管 | 750 |
| E | 325 | 325 μL C管 | 500 |
| F | 325 | 325 μL E管 | 250 |
| G | 325 | 325 μL F管 | 125 |
| H | 400 | 100 μL G管 | 25 (可选) |
| I | 400 | 0 (空白) | 0 |
在96孔板中加入25 μL梯度稀释的BSA标准品和待测蛋白样本（如样本有限可减至10 μL）
每孔加入200 μL BCA工作液（工作液与样本比例为8:1）
震荡30秒充分混合，用微孔板封板膜密封
37°C孵育30分钟（延长孵育时间或升高温度可降低检测下限）
将微孔板冷却至室温
使用微孔板读数仪测量562nm处的吸光值（检测范围540-590nm均可）
将各孔OD值减去空白孔平均值，绘制标准曲线，计算样品浓度
强干扰物质：维生素C、EGTA、铁离子、低纯度蔗糖/甘油、儿茶酚胺、脂类、肌酐、过氧化氢、半胱氨酸、酰肼、酚红、尿酸等。
弱干扰物质：在低浓度时可耐受，但多种干扰物质可能产生加和作用。
可以使用 Pierce快速Gold BCA试剂盒（货号A53225/A53226），只需孵育5分钟即可完成检测，同时保留了经典BCA法的高线性、高去垢剂兼容性。
Thermo Scientific的M-PER、RIPA总蛋白抽提试剂、Mem-PER Plus膜蛋白抽提试剂、NE-PER核蛋白抽提试剂等均可直接使用BCA进行蛋白定量。T-PER抽提后的蛋白经过稀释也可使用BCA定量。
不能。检测多肽浓度需要使用专门的多肽浓度检测试剂盒，如Pierce™ Quantitative Fluorometric Peptide Assay（货号23290）或Pierce™ Quantitative Colorimetric Peptide Assay（货号23275）。